浙江加州国际纳米研究院

浙江加州国际纳米技术研究院LTQ-Orbitrap质谱仪试运行通告

编辑:admin 作者:admin 时间:2006年10月09日 访问次数:1871

  LTQ™ Orbitrap™是由多级线性离子阱(LTQ)和静电场轨道阱(Orbitrap)串联组合高分辨质谱仪,是20年来离子阱质谱技术的重大突破,为小分子研究、药物开发、蛋白质组学、代谢物鉴定和代谢体学提供了更出众的性能。LTQ Orbitrap对在复杂混合物的成分检测和鉴定中提供了更快速、灵敏和可靠的分析能力。在质量准确度、质量分辨率和常规、高灵敏MSn能力方面有出色的表现。

主要性能指标:
Max. Resolution: >100,000
Std Operating Resolution:60,000 @ m/z 400
Internal Standard - MS:< 2 ppm RMS with iLock
Internal Standard - MS/MS:< 2 ppm RMS with iLock
External Standard - MS < 5 ppm (typically 1-3ppm)
External Standard - MS/MS< 5 ppm (typically 1-3ppm)
Mass range:50 to 4000 Da;
split into low and high range,50 to 2000 and 200 to 4000Da
Sensitivity: Sub femtomole.


    浙江加州国际纳米研究院为了实现高通量的蛋白质组鉴定,为LTQ-Orbitrap质谱仪配备了多维色谱仪(EttanTM  MDLC),从而实现了蛋白质多肽混合物从分离到鉴定的完美结合。
    为了尽快服务于教学、科研,现决定从通告之日起,该设备进入试运行阶段,在试运行阶段,我们只接收酶解好的多肽样本(具体要求和酶解方法可参考附件一)

浙江加州国际纳米技术研究院
2006年10月8日
附件一
I. 溶液中水解蛋白质的方法
1. 将蛋白溶解在35µL 25mM NH4HCO3溶液中;
2. 加入5µL 100mM DTT;
3. 56℃水浴孵育1小时;
4. 加入5µL of 450mM新鲜配制的碘乙酰胺;
5. 避光条件下室温作用0.5小时;
6. 按(胰蛋白酶/样品, 质量比)1:20-100比例加入测序级胰蛋白酶;
7. 37℃水浴8-12小时;
8. 加入3µL甲酸, 用精密试纸测定PH<3.0。
II. 所用试剂:
    碳酸氢胺(NH4HCO3)、DTT和碘乙酰胺(Iodoacetamide)均可从Sigma购得;
测序级胰蛋白酶(Sequencing grade trypin, TCPK modified)为用Promega产品。
III. 注意事项:
1.    至少提供5-10pmol的样品量;
2.    100mM DTT可于-20℃冰冻保藏半年;
3.    碘乙酰胺现用现配,不可重复使用; 另该物质有较强毒性,注意戴手套;
4.    溶液配制要用Milli-Q级别的水配制; 
5.    操作过程中要用进口无蛋白枪头和离心管;
6.    操作过程勿带乳胶手套, 可用PE手套;
7.    样品制备好后, 可于4℃短期保存3-7天,-20℃保存1个月;
8.    对于细胞和组织蛋白提取液,建议采用定购蛋白酶说明书上的方法处理。